采用自行研制的脫細(xì)胞基質(zhì)豬肋骨作為支架材料,復(fù)合兔成骨細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞,對其生物相容性、抗原性和細(xì)胞毒性進(jìn)行觀察。 方法:實(shí)驗于2003-04/10在四川大學(xué)華西醫(yī)院人類疾病生物治療教育部重點(diǎn)實(shí)驗室完成。用物理、化學(xué)方法制備脫細(xì)胞基質(zhì)豬肋骨。體外培養(yǎng)兔成骨細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞。而后將試驗分成3組進(jìn)行。①成骨細(xì)胞組:將成骨細(xì)胞與脫細(xì)胞基質(zhì)骨材料復(fù)合。②血管內(nèi)皮細(xì)胞組:血管內(nèi)皮細(xì)胞與脫細(xì)胞基質(zhì)骨材料復(fù)合。③成骨細(xì)胞+血管內(nèi)皮細(xì)胞組:成骨細(xì)胞+血管內(nèi)皮細(xì)胞與脫細(xì)胞基質(zhì)骨材料復(fù)合。④對照組:單純成骨細(xì)胞。于培養(yǎng)1,3,5,7d分別用倒置相差顯微鏡、 組織學(xué)切片和掃描電鏡觀察脫細(xì)胞基質(zhì)異種骨的生物相容性、抗原性;用流式細(xì)胞儀檢測材料對細(xì)胞周期和DNA含量的影響,了解材料對細(xì)胞有無毒性的影響。 結(jié)果:①脫細(xì)胞基質(zhì)骨掃描電鏡觀察:脫細(xì)胞基質(zhì)骨的骨小梁結(jié)構(gòu)完整,骨陷窩空虛,未見細(xì)胞成分殘留。②各組細(xì)胞的生長、分化和增殖情況倒置相差顯微鏡觀察:3組細(xì)胞與脫細(xì)胞基質(zhì)骨材料復(fù)合培養(yǎng)12h后,細(xì)胞在各組材料表面和孔隙內(nèi)均可黏附和生長。③組織學(xué)觀察:MASSON染色顯示3組細(xì)胞在材料表面和孔隙內(nèi)大量增殖,并分泌細(xì)胞外基質(zhì)。以成骨細(xì)胞+血管內(nèi)皮細(xì)胞組材料表面黏附的細(xì)胞數(shù)量多。組織學(xué)切片染色顯示,各組細(xì)胞沿材料邊緣緊密附著,細(xì)胞與材料的組織相容性良好。④各組細(xì)胞黏附、生長、增殖和基質(zhì)分泌情況掃描電鏡觀察: 3組細(xì)胞與材料復(fù)合培養(yǎng)5d后,細(xì)胞緊密黏附在材料表面。成骨細(xì)胞呈梭形或多角形,相鄰細(xì)胞間有突起相互連接。血管內(nèi)皮細(xì)胞呈橢圓形,有角狀突起,與材料附著緊密。其中,成骨細(xì)胞+血管內(nèi)皮細(xì)胞組材料表面黏附大量細(xì)胞,并有較多膠原形成。血管內(nèi)皮細(xì)胞組材料表面膠原形成很少。⑤細(xì)胞周期和DNA含量:成骨細(xì)胞+血管內(nèi)皮細(xì)胞組1d,3dDNA合成期高于單獨(dú)細(xì)胞組,無異倍體細(xì)胞。 結(jié)論:脫細(xì)胞基質(zhì)骨具有良好的生物相容性、極低的抗原性、無細(xì)胞毒性和致瘤性。成骨細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞聯(lián)合培養(yǎng)細(xì)胞在脫細(xì)胞基質(zhì)異種骨中有很強(qiáng)的增殖潛力。 |
