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ELISA酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)免疫分析是一種利用特定抗體與抗原或半抗原發(fā)生的高選擇性高特異性識(shí)別和結(jié)合原理，對(duì)待測(cè)抗體或者抗原進(jìn)行分析測(cè)定的方法，酶聯(lián)免疫吸附分析（下稱ELISA）是免疫分析的一種，分三個(gè)部分組成：免疫識(shí)別，信號(hào)輸出和數(shù)據(jù)處理。
ELISA試劑盒標(biāo)本保存，在ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中是非常重要的。標(biāo)本保存不當(dāng)可能會(huì)導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果異常，如顏色背景深、非特異性染色、標(biāo)準(zhǔn)曲線不佳等問題。以下是一些解決這些問題的方法：
1. 顏色背景深/非特異性染色
1) 充分清洗酶標(biāo)板：確保每個(gè)微孔的洗滌液量一致，清洗后用力按壓在吸水紙上，重復(fù)2-3次。
2) 避免污染：檢查試劑，避免錯(cuò)加其他試劑；操作時(shí)更換吸頭，使用移液器減少污染。
3) 控制孵育和顯色時(shí)間：嚴(yán)格按照說明書控制時(shí)間，避免過長(zhǎng)。
4) 稀釋抗體：如果抗體濃度過高，按要求稀釋后再使用。
5) 保存底物避光：底物應(yīng)避光保存，避免曝光。
6) 正確使用濾鏡片：校正相應(yīng)波長(zhǎng)后再讀取吸光值。
2. 所有孔均無明顯顏色
1) 檢查試劑：確認(rèn)試劑盒內(nèi)各組分正確配制和使用。
2) 確認(rèn)酶標(biāo)物狀態(tài)：確保容器不含酶抑制劑，洗液容器已清洗。
3) 檢查操作步驟：嚴(yán)格審閱操作步驟，確保無遺漏。
4) 保存條件：在有效期內(nèi)使用，按說明書保存條件。
5) 平衡溫度：所有試劑和樣品應(yīng)室溫平衡30分鐘。
6) 控制孵育時(shí)間：確保足夠反應(yīng)時(shí)間。
7) 控制洗板次數(shù)和濃度：按說明書操作，避免過度洗滌。
8) 檢查濾光片：確認(rèn)讀取吸光值時(shí)使用的濾光片正確。
3. 標(biāo)準(zhǔn)曲線不佳
1) 標(biāo)準(zhǔn)品配制：嚴(yán)格按照說明書配制標(biāo)準(zhǔn)品。
2) 儲(chǔ)存條件：按照說明書條件保存，避免重懸組分室溫放置過久。
3) 混勻樣品：加入多種樣品后充分混勻，防止不溶物。
4) 正確洗板：洗滌液注滿孔中，但不溢出，確保洗板機(jī)無遺漏，洗滌充分。
5) 避免殘留：加液時(shí)吸頭盡量沿孔壁加液，避免孔壁殘留液體過多。
6) 避免污染：吸取不同試劑更換吸頭，配置不同組分使用不同器皿。
4. 樣本保存異常
1) 避免反復(fù)凍融：樣本保存時(shí)避免反復(fù)凍融，影響蛋白等分子。
2) 分裝保存：標(biāo)本收集后及時(shí)分裝，-20℃或-70℃保存。
3) 避免細(xì)菌污染：采集及分離過程注意無菌操作，避免細(xì)菌分解蛋白。
4) 平衡溫度：冷凍樣本恢復(fù)室溫時(shí)輕柔混勻，避免劇烈振蕩。
通過上述方法，可以有效解決ELISA實(shí)驗(yàn)中由于標(biāo)本保存不當(dāng)引起的異常現(xiàn)象，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
